可否使用不同的培養(yǎng)基?
對于購買的商品化細胞來說,產(chǎn)品目錄或者細胞說明書上所推薦的培養(yǎng)基,一般是細胞株的原始提供者推薦的培養(yǎng)基,或者是經(jīng)過驗證的最利于該細胞株生活的培養(yǎng)基。其他培養(yǎng)基存在一定培養(yǎng)風(fēng)險。因此,應(yīng)謹慎更換培養(yǎng)基,一定要更換,推薦實驗前預(yù)先保留一份細胞種。
更換培養(yǎng)基有兩種方法:
1、直接更換,強制使細胞適應(yīng)新的培養(yǎng)基;
2、還有一種更溫和的方法,傳代細胞的時候,將新培養(yǎng)基與原推薦使用的培養(yǎng)基1:1混合,并另外分出一板細胞,用原先推薦的培養(yǎng)基。傳代后仔細觀察細胞的生長狀態(tài),如果混合培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞生長狀態(tài)不好,應(yīng)立即停止更換培養(yǎng)基。若生長狀態(tài)好,可以繼續(xù)傳代分瓶,一板保留原推薦培養(yǎng)基,另外一板新培養(yǎng)基與原推薦使用的培養(yǎng)基3:1混合,繼續(xù)觀察,如果細胞狀態(tài)好,可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。
Vol.2
細胞株的污染鑒定、預(yù)防和處理問題
普通微生物污染:培養(yǎng)基渾濁,高倍鏡觀察有微生物污染;按規(guī)定棄用并全面嚴格滅菌。
支原體污染:顯微鏡很難直接觀察,細胞通常表現(xiàn)為細胞生長緩慢,有細胞漂浮等等,可通過MB Venor®Gem qEP試劑盒,進行支原體檢測。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,應(yīng)按規(guī)定棄用,實驗室要及時全面消毒滅菌,防止蔓延,推薦使用MB Mycoplasma-off™對細胞培養(yǎng)環(huán)境進行清理 ,使用Water Shield™對水槽進行清潔、預(yù)防處理。如果細胞株珍貴,可用MB相關(guān)支原體祛除試劑Mynox®、Mynox® Gold、Zell Shield®對細胞進行處理。
Vol.3
如何挑選胎牛血清?
細胞要養(yǎng)好,需要選擇品質(zhì)優(yōu)異的血清,如Ausbian®進口特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。
WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:
1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,并應(yīng)具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。
2、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。
3、證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
4、血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。
5、無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。
6、對細胞有良好的支持繁殖作用。
我國對牛血清的質(zhì)量中提出比較嚴格的標準要求:
包括蛋白質(zhì)含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素,支持細胞增殖檢查。一款來自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市場上頗受歡迎。它具有精選內(nèi)毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次,滿足干細胞、基因敲除、原代培養(yǎng)、細胞典藏、長期傳代等各類細胞的培養(yǎng)要求;澳洲血源,完整的檢測報告及滅病毒服務(wù),為各類臨床相關(guān)項目的申報提供完整支持等特點。