微生物污染是造成細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因
(一)物理消毒法
1、紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射,可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感,其次是陽性菌,再次為芽孢,真菌孢子的抵抗力*強(qiáng)。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活,間接作用是通過紫外線照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒,用法簡單,效果好。
紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強(qiáng)度和照射劑量呈正相關(guān),輻射強(qiáng)度隨燈距離增加而降低,照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平方米房間,每天照射2-3小時,期間可間隔30分鐘。燈管離地面2米以外要延長照射時間,2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作臺的距離不應(yīng)超過1.5米,照射時間30分鐘為宜。
紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害,且對培養(yǎng)細(xì)胞與試劑等也產(chǎn)生不良影響,因此,不要開著紫外等操作。
2、高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力,能造成蛋白質(zhì)變性凝固而使微生物死亡。布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養(yǎng)液都可以用這方法滅菌。
不同壓力蒸汽所達(dá)到的溫度不同,不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品(不包括液體),應(yīng)立即放到60-70℃烤箱內(nèi)烘干,再貯存?zhèn)溆茫駝t,潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法,它具有條件簡單、使用方便等特點(diǎn)。
3、高溫干熱消毒:干熱滅菌主要是將電熱烤箱內(nèi)物品加熱到160℃以上,并保持90-120分鐘,殺死細(xì)菌和芽孢,達(dá)到滅菌目的。主要用于滅菌玻璃器皿(如體積較大的燒杯、培養(yǎng)瓶)、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品(如粉劑、油劑)。
干熱滅菌后要關(guān)掉開關(guān)并使物品逐漸冷卻后在打開,切忌立即打開,以免溫度驟變而使箱內(nèi)的玻璃器皿破裂。干烤箱內(nèi)物品間要有空隙,物品不要靠近加熱裝置。
燒灼也是滅菌方法之一,常利用臺面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進(jìn)行燒灼消毒。
4、過濾除菌:是將液體或氣體用微孔薄膜過濾,使大于孔徑的細(xì)菌等微生物顆粒阻留,從而達(dá)到除菌目的。在體外培養(yǎng)時,過濾除菌大多用于遇熱容易變性而失效的試劑或培養(yǎng)液。目前,大多實(shí)驗(yàn)室采用微孔濾膜濾器除菌。關(guān)鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。
(二)化學(xué)消毒:新潔而滅,其0.1%水溶液可對器械、皮膚、操作表面進(jìn)行擦拭和浸泡消毒。
(三)抗生素消毒:抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液,是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不嚴(yán)重時的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同,應(yīng)根據(jù)需要選擇。
可用于細(xì)胞培養(yǎng)的消毒滅菌方法很多,但每種方法都有一定的適應(yīng)范圍。如常用的過濾除菌系統(tǒng)、紫外照射、電子殺菌燈、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒實(shí)驗(yàn)室空氣;多用新潔而滅消毒實(shí)驗(yàn)室地面;常用干熱、濕熱消毒劑浸泡、紫外照射等方法消毒培養(yǎng)用器皿;采用高壓蒸汽滅菌或過濾除菌方法消毒培養(yǎng)液。
工作區(qū)域中祛除支原體的方法
試驗(yàn)臺、超凈臺、培養(yǎng)箱、液氮罐、移液器、門把手、電話等細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
被支原體污染,可引起細(xì)胞的污染。應(yīng)定期對工作區(qū)域進(jìn)行消毒。
特點(diǎn)及原理
1)快速有效
噴霧劑中含有支原體專用殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。
2)廣譜抗菌
不僅能祛除支原體,而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。
3)無腐蝕性和致癌性
乙醇作為溶劑,無腐蝕性和致癌性成分
4)操作簡便
即用型消毒液,可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。
1. 將Mycoplasma-Off®均勻噴于待消毒的潔凈臺或?qū)嶒?yàn)設(shè)備和器材的表面。
2. 等待5-10分鐘。
3. 用干燥紙巾將已噴過Mycoplasma-Off®的潔凈臺或?qū)嶒?yàn)設(shè)備和器材的表面搽拭干凈。
4. 將已消毒的潔凈臺通風(fēng)2-3分鐘,或?qū)⒁严镜膶?shí)驗(yàn)設(shè)備和器材置于通風(fēng)處2-3分鐘。
5. 將剩余的Mycoplasma-Off®噴霧劑置于陰涼通風(fēng)處保存。
儲存條件
室溫保存12個月