內(nèi)毒素是細菌產(chǎn)生的,在細胞培養(yǎng)過程中,容易在血清中出現(xiàn)。血清中如果含有大量內(nèi)毒素,則會對細胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重的影響。因此,選擇內(nèi)毒素含量低的血清,對細胞培養(yǎng)十分重要。Ausbian進口特級胎牛血清,內(nèi)毒素含量低,≤3EU/ml,澳洲血緣。
最近發(fā)現(xiàn)的許多細菌抗病毒系統(tǒng)在結(jié)構(gòu)和功能上都與后生動物先天免疫的成分具有同源性。這種祖先聯(lián)系的一個例子包括細菌中的CBASS,它類似于后生動物中環(huán)GMP-AMP合成酶(cGAS)-干擾素基因刺激因子(STING)抗病毒途徑。CBASS包含兩個核心成分:cGAS/ dncv樣環(huán)核苷酸轉(zhuǎn)移酶(CD-NTase,也稱為Cdn)酶,在病毒(噬菌體)感染時產(chǎn)生環(huán)核苷酸,以及結(jié)合環(huán)核苷酸觸發(fā)宿主死亡或生長停滯從而抑制病毒繁殖的效應(yīng)蛋白。除了環(huán)化酶和效應(yīng)基因外,CBASS操縱子還可以編碼輔助蛋白,用于將其分為四種主要類型,I-IV。
環(huán)核苷酸免疫的一個核心方面是環(huán)化酶的激活機制,也就是說,酶如何感知病毒感染,開始合成第二信使。對于人類cGAS,這是通過與存在于細胞質(zhì)中的病毒雙鏈DNA直接相互作用來實現(xiàn)的。然而,在動物中存在的其他cGAS同源物可以感知RNA而不是DNA。然而,在細菌CBASS應(yīng)答過程中,環(huán)化酶激活的機制尚不清楚。
近日,科研人員對來自多種不同CBASS操縱子的細菌環(huán)化酶的生化分析表明,其中一些酶在體外具有組成性活性,這表明它們在體內(nèi)的活性受到負調(diào)控,只有在噬菌體識別時才會釋放出來。相反,也有許多CBASS環(huán)化酶在體外失活的例子,因此必須需要一種激活機制來啟動免疫反應(yīng)。該研究對葡萄球菌中I型CBASS環(huán)化酶的激活機制進行時揭示。
相關(guān)研究發(fā)表在《Nature》上,文章標(biāo)題為:“Bacterial cGAS senses a viral RNA to initiate immunity"。