一、血清的儲存
1、長期儲存:
血清在生產(chǎn)制備完成后,通過質(zhì)量檢測,然后被運送至市場上銷售。整個過程中,包括運輸流程,儲存溫度應(yīng)嚴格保證在-20℃,避免反復(fù)凍融影響血清活性。
實驗人員在收到血清,檢查完好后,及時將血清送至-20℃冰箱中儲存,用時再取出采用三步法解凍。
在未解凍的情況下,血清可長期儲存在在-20℃或-80℃環(huán)境中,只要是在保質(zhì)期內(nèi),均能正常使用。
儲存過程中,需要定期監(jiān)控儲存血清的冰箱中,溫度是否符合規(guī)定,保證冰箱制冷效果(-20℃)是否正常,盡量避免出現(xiàn)溫度大幅度的波動的情況,防止血清因溫度變化而反復(fù)凍融的情況出現(xiàn)。
另外,盡量將血清獨立存放于一定區(qū)域(恒溫區(qū)域),避免反復(fù)開關(guān)冰箱門對儲存溫度造成影響。
2、在4℃冰箱中的儲存:
解凍后的血清,不宜在4℃冰箱中放置過久。
血清在生產(chǎn)加工運輸過程中,沒有添加外源抗菌成分。因此開封后,如果長期保存在使用頻率高且潔凈度差的4℃冰箱中,很容易染菌。
如果配制為培養(yǎng)基,添加了雙抗,可以在一定程度上減少培養(yǎng)基污染的風(fēng)險,但是由于基礎(chǔ)培養(yǎng)基的添加,使得整體成分更為復(fù)雜,保存不當則會使有效物質(zhì)活性降低。
因此,我們建議,添加了血清的培養(yǎng)基盡量做到現(xiàn)配現(xiàn)用;解凍后的血清不要長期儲存在4℃冰箱中,盡可能不要超過7天。
二、血清的解凍
當血清需要被解凍時,我們不建議大家把剛從-20℃中拿出的冰凍血清,直接放入4℃冰箱中過夜融化,也不要在室溫進行過夜解凍。
由于血清含有蛋白質(zhì)等干物質(zhì),這類物質(zhì)容易先融化析出,水這類溶劑后融化,導(dǎo)致血清產(chǎn)生沉淀,影響使用效果。
因此,要盡可能保證所有成分同步融化,因此我們建議使用三步法融化,具體步驟見下表。
需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,三步法解凍前,應(yīng)先將血清轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中存放1-2天。
一次解凍后,分裝至無菌離心管中,盡量保證每管是一次的用量,分裝管解凍也遵循三步法,解凍后需全部用完。
三、血清的使用
1、血清的熱滅活:
血清進行熱滅活的目的是,利用較高的溫度使補體失活。由于胎牛血清會嚴格控制采血時間為5-8月齡的胎牛,此時還未形成完整的補體系統(tǒng),因此,合格的胎牛血清,是不需要滅活的。
但是實驗中如果需要新生牛血清、小牛血清、豬血清或馬血清這些血清時,則需要根據(jù)實驗要求而定。
根據(jù)血清廠家多年來總結(jié)的經(jīng)驗,常規(guī)解凍后,40℃水浴加熱20分鐘即可,能夠盡可能地保留營養(yǎng)成分。
2、細胞培養(yǎng)的應(yīng)用:
對于新的細胞系或從無血清培養(yǎng)轉(zhuǎn)變到胎牛血清培養(yǎng)的細胞系,需要進行適應(yīng)期。在初始適應(yīng)期,可以將血清濃度逐漸降低,直到細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)為止。
3、關(guān)注血清的批次:
相同品牌的胎牛血清,在蛋白質(zhì)含量等方面,可能會存在批次差異,因此在同一實驗中最好使用來自同一批次的血清,以減少變異性。如果不得不使用不同批次的胎牛血清,請進行驗證實驗以確保結(jié)果的可重復(fù)性。
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