原代細胞是一類細胞的統(tǒng)稱,具體是指從來源于活體組織,通過特定的分離方法制備得來的比較原始的一類細胞。體外培養(yǎng)原代細胞是現(xiàn)代生命科學研究生物中,十分重要的實驗手段之一。通過原代細胞的體外培養(yǎng),使科研人員能在體外觀察并研究原始細胞的特性和行為。
原代細胞培養(yǎng)如此重要,但培養(yǎng)起來卻苦難重重。容易污染、成活率低等問題都困擾著科研人員。
本文將介紹一般的原代細胞培養(yǎng)步驟,以及一些常見的培養(yǎng)技巧和注意事項。
第一部分:準備工作
在進行原代細胞培養(yǎng)之前,我們需要準備以下實驗室設(shè)備和試劑:
無菌操作臺和培養(yǎng)箱:用于提供無菌環(huán)境,以防止細胞污染。
培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶:用于細胞的培養(yǎng)和擴增。
培養(yǎng)基和培養(yǎng)液:包含必要的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子,為細胞提供適宜的生長環(huán)境。
顯微鏡:用于觀察和評估細胞生長情況。
第二部分:原代細胞的分離與培養(yǎng)
組織收集:從動物或人體中取得待培養(yǎng)的組織,如肺、腎、皮膚等。確保收集過程無菌,并盡量迅速進行下一步操作。
細胞分離:將組織切割成小塊,并用酶消化液(如胰蛋白酶、膠原酶等)進行細胞的分離。注意避免酶消化時間過長,以免對細胞產(chǎn)生損傷。
細胞收獲:過濾酶消化液,將細胞懸浮液離心分離細胞。去除上清液,用適當?shù)呐囵B(yǎng)基懸浮細胞。
細胞培養(yǎng):將細胞懸浮液均勻分布在無菌培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,加入適當?shù)呐囵B(yǎng)基。確保培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的表面干凈,并避免細胞過度密集。
細胞培養(yǎng)條件:將培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶放置于恒溫培養(yǎng)箱中,溫度通常為37攝氏度。同時,保持培養(yǎng)基的穩(wěn)定性和合適的濕度。
第三部分:培養(yǎng)技巧與注意事項
避免細胞污染:在操作過程中,務(wù)必保持無菌操作,使用無菌試劑和器具,并經(jīng)常對培養(yǎng)環(huán)境進行消毒。定期檢查細胞培養(yǎng)是否受到細菌、真菌或其他污染物的污染。
培養(yǎng)基的更換:定期更換培養(yǎng)基,以提供新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)和細胞生長因子。根據(jù)細胞類型的需求,可以選擇使用不同的培養(yǎng)基和添加劑。
細胞傳代:當細胞達到合適的密度時,可以進行細胞傳代,將細胞移植到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中。注意傳代過程中的細胞數(shù)目和均勻性。
細胞凋亡與分化:在長期培養(yǎng)過程中,一些原代細胞可能會發(fā)生凋亡或分化。根據(jù)研究需要,可以添加適當?shù)囊蜃踊蚋淖兣囵B(yǎng)條件來控制細胞的凋亡和分化。
原代細胞的培養(yǎng),需要選擇一款高品質(zhì)的胎牛血清,無污染、低內(nèi)毒素、富含營養(yǎng)物質(zhì)。Ausbian進口特級胎牛血清,通過各項嚴格的無菌檢測、內(nèi)毒素≤3EU/ml、精選自5-8月齡牛胚胎,澳洲血源,為原代細胞培養(yǎng)提供保障。