牛血清是目前細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的、細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成分,具有極為重要的功能。
要保證血清質(zhì)量,需要有嚴(yán)格的質(zhì)控,包括從外觀到理化性質(zhì)、細(xì)胞增殖試驗(yàn)和微生物檢查,制定一系列的標(biāo)準(zhǔn),以及出廠產(chǎn)品能符合這些標(biāo)準(zhǔn)。
一、外觀及相關(guān)物質(zhì)含量
以胎牛血清為例,優(yōu)質(zhì)的特級(jí)胎牛血清,外觀應(yīng)是淡棕色至橙色透明液體,無顆粒物沉淀。
PH在6.7-8.2之間;
滲透壓在260-340mosm/kg之間;
血紅蛋白含量小于20mg/dL;
總蛋白含量在30-50g/L;
白蛋白含量在14-34g/L;
α、β、γ球蛋白含量則以實(shí)際測(cè)量為準(zhǔn);
IgG應(yīng)小于250μg/mL;
內(nèi)毒素含量應(yīng)小于3EU/mL;
內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對(duì)細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代
二、無菌檢測(cè)
優(yōu)質(zhì)的特級(jí)胎牛血清還要經(jīng)過嚴(yán)格的無菌檢測(cè)。確保血清無污染。
檢測(cè)項(xiàng)目包括厭氧菌、好氧菌、真菌(最容易污染細(xì)胞的酵母菌和霉菌都應(yīng)包括在內(nèi))以及支原體檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)全部為陰性,視為通過無菌檢測(cè)。
三、病毒檢測(cè)
血清含有bing毒,會(huì)導(dǎo)致宿主細(xì)胞發(fā)生腫脹、壞死、脫壁,不僅嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度,更可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成威脅。
對(duì)于血清中的病毒檢測(cè),重點(diǎn)放在那些曾世界大范圍爆發(fā)、人畜共患或是十分常見的病毒身上。
每個(gè)地區(qū)的法規(guī)會(huì)有些許區(qū)別,但牛副流感3型病毒(PI-3)、牛腹瀉病毒(BVD)、牛細(xì)小病毒等是任何國(guó)家和地區(qū)的檢測(cè)報(bào)告中,都應(yīng)標(biāo)注清楚的。
一批合格的血清,所有bing毒檢測(cè)項(xiàng)目均應(yīng)為陰性。
四、細(xì)胞生長(zhǎng)情況
促進(jìn)細(xì)胞增殖方面,也是血清一項(xiàng)不可忽視的指標(biāo)。每一批次血清也應(yīng)就克隆率、細(xì)胞毒性、細(xì)胞增殖密度、和倍增時(shí)間進(jìn)行檢查。
所有檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)的規(guī)范。
五、抗體檢測(cè)
病毒檢測(cè)反映的是動(dòng)物采血時(shí)、或血清加工過程中有沒有感染病毒,而抗體檢測(cè)則表示該供體動(dòng)物在采血前一段時(shí)間內(nèi),是否感染過病毒。
優(yōu)質(zhì)的特級(jí)胎牛血清,應(yīng)保證動(dòng)物從始至終都沒有感染過相關(guān)病毒,因此檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。
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