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支原體DNA抽提Kit特點(diǎn)及操作步驟

更新時(shí)間:2022-06-23  |  點(diǎn)擊率:518

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,病原污染可以算得上是科研工作者的噩夢(mèng)了。其中支原體污染更像是一個(gè)無(wú)形的殺手,時(shí)刻威脅著細(xì)胞的安全。

細(xì)菌真菌污染還有跡可循,起碼顯微鏡下能夠清晰地看到,但是支原體個(gè)子小,不易觀察,由于繁殖速度比較慢,前期感染幾乎沒(méi)有癥狀。經(jīng)常稍不留意,就中了支原體的「陰招」。統(tǒng)計(jì)顯示,全球大約有60%左右的細(xì)胞培養(yǎng)存在或曾經(jīng)存在過(guò)支原體污染。

那到底如何判斷細(xì)胞究竟有沒(méi)有感染支原體?今天我們就來(lái)從原理上深扒一下,網(wǎng)傳的肉眼判斷是否感染支原體大法到底正不正確!

支原體感染癥狀1:細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至死亡?

被廣泛使用的細(xì)胞培養(yǎng)基,不僅給細(xì)胞提供支持和養(yǎng)分,對(duì)于支原體而言,也是天堂一般的存在。

適宜的溫度(37℃)

合適的PH(7-8之間都可生存)

充足的養(yǎng)分(各種氨基酸、生長(zhǎng)因子等)

一定的二氧化碳(5%左右)

與細(xì)胞培養(yǎng)高度重合的培養(yǎng)條件,注定了支原體要與細(xì)胞共同競(jìng)爭(zhēng)有限的生存資源。

早有研究表明[1],一些支原體(包括最為常見的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等),通過(guò)精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來(lái)供能。當(dāng)這些支原體混入細(xì)胞培養(yǎng)體系后,會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)搶精氨酸,導(dǎo)致細(xì)胞「吃不飽飯」,出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良的癥狀:生長(zhǎng)速率異常、活力下降、易脫壁等等。

如果你培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)以下情況,基本可以確定是支原體感染了,不放心的話可以再配合支原體檢測(cè)試劑(檢測(cè)神器幫你揪出培養(yǎng)基中的支原體!)進(jìn)一步確認(rèn)。

細(xì)胞被支原體污染后的表現(xiàn)

①細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

②細(xì)胞變形

③培養(yǎng)基中碎片增加

④細(xì)胞易聚團(tuán)

⑤鏡下觀察有小黑點(diǎn)

⑥培養(yǎng)基提前變色

除了影響細(xì)胞活力,支原體還會(huì)給細(xì)胞帶來(lái)的幾百種基因表達(dá)的改變,包括編碼受體、離子通道、生長(zhǎng)因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白,可以錨定在胞膜的外表面,被TLR2等免疫細(xì)胞的受體識(shí)別。激活NF-kB途徑,進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞活化[5],偏離最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

支原體DNA抽提Kit特點(diǎn)及操作步驟

特點(diǎn)

1.符合歐洲藥典的要求。

2.從細(xì)胞上清和生物制品中,均可分離支原體DNA,全程只需30分鐘。

3.洗脫DNA純度高,體積50μl,保證PCR最大的靈敏。


操作步驟


支原體DNA抽提Kit特點(diǎn)及操作步驟



試劑盒組分

Spin columns(核酸純化?。?、Collection tubes(收集管)、Conditioner液、Binding Buffer E液、Buffer A1液、Buffer A2液、Buffer E液


儲(chǔ)存條件

室溫


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