葉酸測定培養(yǎng)基用于樣品中葉酸測定,是利用干酪乳桿菌對樣品中的葉酸含量進行微生物法測定。標準溶液配制過程中使用的溶劑、容器必須確保無葉酸殘留;葉酸貯備液存于棕色瓶中,于2℃-4℃冰箱可保存2年,中間液可保存1年,標準工作液臨用前配制。
葉酸是鼠李糖乳桿菌生長所需的營養(yǎng)素,在一定控制條件下,將鼠李糖乳桿菌液接種至含有式樣液的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)一段時間后測定透光率(或吸光度值),根據(jù)葉酸含量與透光率(或吸光度值)的標準曲線計算出試樣中葉酸的含量。
葉酸測定培養(yǎng)基在使用時需注意下面這些事項:
1.本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。水的潔凈程度對本試驗至關(guān)重要,若水中有葉酸殘留或接觸了有葉酸殘留的容器,將直接影響到試驗結(jié)果;
2.試驗中使用的玻璃器具需洗凈后在200℃烘至少2h,必要時可預先用1mol/L的稀鹽酸浸泡再烘,充分去除容器中可能殘留的葉酸;
3.使用的葉酸培養(yǎng)基需確保不含有葉酸,其他營養(yǎng)齊全。若自行配制培養(yǎng)基,需確保原材料中不含有葉酸,制備過程不可污染葉酸。
葉酸測定培養(yǎng)基標準溶液的制備:
(1)葉酸標準貯備液(20.0 μg /mL):精確稱取20.0mg葉酸標準品,用氫氧化鈉乙醇溶液溶解轉(zhuǎn)移至1000mL棕色容量瓶中,定容至刻度。
?。?)葉酸中間液(0.200ug/mL):用氫氧化鈉乙醇溶解將1.0mL葉酸貯備液定容至100mL棕色容量瓶。
(3)葉酸標準工作液(0.200 ng/mL):用水將1.0mL葉酸中間液定容至1000mL容量瓶。